在基因辑小鼠资源的保存领域，精子冷冻技术占据着举足轻重的地位。通过这一技术，小鼠精子能够在液氮中实现长期保存，为科研提供了稳定的遗传资源保障，也是稀有品系小鼠急救的一种有效方式。

然而，精子复苏过程则相对复杂，需要借助体外受精（IVF）和胚胎移植（ET）技术来完成小鼠品系的重建。

中模生物拥有成熟的IVF-ET技术和技术团队，接下来，将详细为大家介绍小鼠精子冷冻及复苏的技术操作。

一、精子选择标准

并非所有雄鼠都适合用于精子冷冻保存，通常，我们会选择12周龄以上性成熟的雄鼠（最佳年龄为3~5月龄），配繁过最佳。这些雄鼠应生长发育良好、反应敏捷、体质强壮、被毛完整有光泽且生育力强。

二、冷冻操作流程

1.制作冻存液滴

在培养皿中央制作一个60μL的冻存液滴，随后，再次加入60μL的冻存液，形成一个底面积小但体积足够大的冻存液滴，将培养皿置于热台上备用。

2.制备精子悬浊液

将雄鼠通过颈椎脱臼法安乐死，开腹取出左右两侧的附睾尾，放在滤纸上剥离附睾尾上的脂肪和血液。随后，将附睾尾放入M2操作滴液中清洗。接着，将两侧附睾尾放入冻存液微滴中，用剪刀在附睾尾处剪开5~6个切痕，并轻轻挤压附睾以加速精子释放。

3.精子填充进麦管

将洁净的空皿置于37℃恒温热台上，用10μL移液枪吸取精子悬浊液滴10μL。可以吸取出10个小微滴，将第10个微滴加入到精子获能液滴中，放入培养箱培养10分钟后观察液滴边缘的精子运动情况，初步判断该批次冻存精子的品质（如活精数量和精子活动速率）。

接下来，将麦管的棉塞端插入对应的1mL注射器中，依次吸入装管液、空气和精子悬液。继续吸入装管液直至浸润棉塞，然后用麦管封口器将麦管靠精子端密封。

4.液氮冷冻保存

将麦管置于液氮蒸汽上预冷10分钟后，立即将其完全没入液氮中进行长期保存。

三、精子复苏操作流程

当需要复活小鼠时，我们需要将冻存的小鼠精子进行复苏，并通过体外受精技术使其成功孕育成小鼠。

1.准备体外受精（IVF）所需的雌鼠

提前对供体雌鼠进行超排处理，然后剪下其输卵管并剥离出卵团，将卵团放入受精液微滴中备用。

2.复苏冻存精子

从液氮中取出精子麦管，并将其放入37℃水浴锅中加热10分钟。10分钟后取出麦管，剪断棉塞端并插入注射器中。将精子悬浊液推入精子获能液微滴中，并在培养箱中培养30分钟以完成获能过程。

3.加精与体外受精

吸取有活力的精子并加入到提前备有卵子的受精液微滴中。将培养皿放入培养箱中培养，直至发育到受精卵或2细胞阶段。

4.移植与饲养孕鼠

提前准备好假孕鼠，并将受精卵或2细胞移植到假孕鼠的输卵管中。随后饲养有孕雌鼠，等待小鼠出生。

通过以上步骤，我们可以成功实现小鼠精子的冷冻与复苏，为基因编辑小鼠资源的保存和利用提供有力支持。

中模生物通过IVF-ET技术，截至目前已成功交付上千只净化子代鼠，帮助众多科研客户实现快速繁育、品系急救、病原净化、冻存保种及复苏等实验，欢迎有基因编辑鼠、急需大量净化鼠源的科研人士前来体验。