在组织学研究领域，石蜡切片凭借其可长期储存、组织结构清晰呈现等诸多显著优势，在光镜技术中占据着极为重要的地位，被广泛应用。

石蜡切片的制作有一套严谨且完整的流程，依次为固定、取材、脱水透明、浸蜡、包埋、切片、摊片烤片，每个环节又有很多关键知识点不容错过，你知道吗？

中模生物病理实验平台拥有一支专业技术团队，配备了一站式的先进设施。从石蜡包埋设备、冷冻切片仪器，到HE染色与免疫荧光染机，再到智能显微镜，一应俱全。能够全方位支持不同部位组织石蜡切片的制备、染色以及分析工作。

石蜡切片制作要点

1.固定

在石蜡切片制作过程中，固定环节至关重要。

它不仅能使组织变得坚硬，为后续切片操作提供便利，还能有效维持组织当前的理化性质。

需要注意的是，不同类型的组织需选用适配的固定液。而且，组织固定的时间并非一成不变，要根据组织块的类型和大小灵活调整。

对于一些难以浸入固定液的组织，在不破坏其结构的前提下，可在组织上扎一些针孔，促进固定液渗透。

实际操作时，将取样的样本浸入固定液，常规选择4%中性甲醛（10%中性福尔马林），固定时间不得少于24小时。

固定液的量至少要达到被固定样本体积的5-10倍。若组织样本较大，应先切成取材所需的大小再固定，防止脏器中心发生自溶。像皮肤样本容易皱缩，可将其贴在牛皮纸上进行固定。

根据病理学特殊检查需求，也可选用其他适宜的固定液。

2.取材

取材环节要求动作迅速，不可拖延过久，否则可能引发组织内蛋白质降解或其他理化性质变化，导致无法呈现组织原有的形态结构。

切片材料应根据需要观察的部位进行精准选择，尽量避免损伤所需部分。

将固定好的样本按照病理检查的目的要求切成适当大小的组织块，组织块厚度不宜超过0.5cm，否则后续脱水可能不彻底，进而影响切片质量。

3.脱水透明

脱水的目的是去除组织中的水分，为后续的透明、浸蜡、包埋等步骤创造条件，常用的脱水剂是酒精。

脱水过程需循序渐进，通常采用等级脱水（系列脱水）的方式，即从较低浓度酒精开始，逐渐过渡到高浓度酒精，以免组织变硬变脆或发生收缩。

一般流程为：50%→70%→80%→95%（此时可加少许番红，使组织着色便于包埋时定位）→无水酒精（两次），每级停留时间2-4小时或更长（无水酒精中时间宜短）。

脱水后的组织要放入二甲苯中进行透明处理，但透明时间要严格控制，否则组织会变得坚硬且脆。

4.浸蜡

浸蜡过程中，石蜡慢慢溶于浸有材料的透明剂中，溶解在透明剂中的石蜡逐渐深入到材料的细胞内，最终使透明剂完全被石蜡取代，石蜡浸入组织后能对组织起到支撑作用，为切片做好准备。

浸蜡一般从低温到高温、从低熔点到高熔点逐步进行。软材料可使用熔点较低的石蜡，较硬的材料则使用熔点较高的石蜡；冬季可选用熔点较低的石蜡，夏季选用熔点较高的石蜡。石蜡必须纯净，不含杂质。整个浸蜡过程需在恒温箱内进行（温度可根据需要调整）。

5.包埋

浸蜡完成后进行包埋操作。

用镊子轻轻夹取组织放入包埋模具中，包埋时要注意组织摆放的方向，可利用镊子对组织位置进行调整。

石蜡开始凝固后不可再调整，否则容易产生空泡，不利于组织包埋。

包埋时，根据样本大小选择三种规格的包埋模具，组织的切面朝下，尽量处于模具中央。

6.切片

切片前一般会将蜡块进行预冷，以便于切片。

切片时先进行粗修，粗修时要保证组织样本全部暴露出来，然后将粗修的蜡块再次预冷后开始切片。

切片时要确保切片机刀架、刀片固定处锁紧，若刀片达到使用寿命或受损，需及时更换新刀片，防止产生刀痕。

石蜡切片厚度一般为3-6μm，切片时要注意控制速度，避免过慢或过快导致切片厚薄不均，切片过厚不利于后期观察。

7.粘片

切下来的切片经过镜检（根据实际情况也可不检），将符合要求的切片粘在洁净的载玻片上。

粘片时，先在载玻片上滴上一小滴粘片剂，再加几滴蒸馏水，然后用镊子小心地把切片放在水上，在35-40℃下，用拨针将切片伸直、展平，倾斜载片，使水流去并烘干。

8.摊片与烤片

切下来的组织切片要放在摊片机上进行摊片，目的是使组织切片摊平，减少褶皱。

摊片温度一般为40℃左右，摊片时间不宜过长，摊平即可捞取。

捞取组织后的玻片放在烤片机上烤片，使组织黏附在载玻片上，烤片时间一般为2-4个小时。烤片时间过短会导致染色时脱片，时间过久则会导致组织破损。

摊片烤片过程中也有一些注意事项：保持摊片机水的清洁，保持玻片干净，避免切片上有杂质；摊片机温度可根据组织样本特点进行设置，如脑组织需低温摊片；对于脑、脊髓等组织，摊片温度以40℃为宜。

9.染色与封片

染色的目的是区分组织中各个不同的结构，石蜡切片常用的染色方式为HE染色。在染色前需查看染料的使用时长，使用时间过久的染料着色较浅，会影响染色质量。

完成染色的切片要短暂晾干玻片上的试剂，时间不宜过久，否则切片会干燥。然后滴加1-2滴封片剂进行封片，封片时要倾斜缓慢盖下盖玻片，防止产生气泡。

染色封片后就可以进行组织分析或长期储存。

整个流程到此就完成了，过程中的注意事项，你记住了吗？

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